Клостридия (Clostridium difficile), типирование токсина А и В, качественное определение ДНК методом ПЦР (кал)

Анализ на Clostridium difficile, типирование токсинов A и B, с качественным определением ДНК методом ПЦР в кале — это лабораторное исследование, которое используется для диагностики инфекции, вызванной бактерией Clostridium difficile. Он помогает определить самого агента и его токсинов, а также подтвердить или исключить диагноз, связанный с инфекцией кишечника.

Описание бактерии

Clostridium difficile — это анаэробная (не требующая кислорода для жизнедеятельности) бактерия, которая является естественным обитателем кишечника. То есть, в норме она не вызывает заболеваний. Однако, когда баланс кишечной флоры нарушается (например, после применения антибиотиков), C. difficile может размножаться и выделять токсичные вещества, которые повреждают стенки кишечника, вызывая воспаление и более тяжелые заболевания, например, псевдомембранозный колит.

Микроорганизм выделяет два типа токсинов:

• A — это энтеротоксин, повреждающий клетки кишечной стенки, что способствует развитию воспаления и приступов диареи;
• B — это цитотоксин, который оказывает сильное разрушительное действие на клетки кишечной стенки, что способствует развитию некроза тканей.

1. difficile образует споры, которые могут выживать в окружающей среде долгое время, что способствует ее распространению через загрязненные поверхности или продукты.

Особенности заболевания

Бактерия вызывает различные заболевания, преимущественно поражающие кишечник. Основная патология — это антибиотико-ассоциированная диарея. Развивается после длительного использования антибиотиков, которые нарушают нормальную микрофлору кишечника, предоставляя возможность C. difficile размножаться. Характерные симптомы: диарея, боль в животе, повышение температуры, признаки обезвоживания.

Также возможно развитие других патологий:

1. Инфекционный колит. Патология, ассоциированная с воспалением толстой кишки. Симптомы: интенсивная диарея (часто с примесью крови), сильная боль в животе, лихорадка. В тяжелых случаях может привести к обезвоживанию, сепсису и необходимости хирургического вмешательства (например, удаление части кишечника).
2. Псевдомембранозный колит. Характеризуется образованием на слизистой оболочке толстой кишки псевдомембран — желтовато-белых фиброзно-эксудативных налетов, которые можно увидеть при эндоскопии. Симптомы: обильная диарея с кровью, высокая температура, резкие боли в животе. Это состояние требует срочного медицинского вмешательства, так как может привести к перфорации кишечника, сепсису и летальному исходу без своевременного лечения.
3. Токсический мегаколон. Это тяжелое осложнение инфекции C. difficile, при котором развивается аномальное расширение толстой кишки, что приводит к ее параличу и разрушению. Симптомы: выраженная боль в животе, вздутие, температура, признаки шока.

Причинами развития патологий являются:

• длительное использование антибиотиков (особенно широкого спектра действия), т.к. они убивают нормальную микрофлору кишечника;
• слабый иммунитет — у пожилых людей, детей, беременных, после инфекций и операций;
• госпитальные условия в больницах и других медицинских учреждениях, где пациенты находятся в условиях с высокой концентрацией бактерий и других патогенов.

При отсутствии лечения инфекция C. difficile может привести к смертельным последствиям, особенно у людей с ослабленным иммунитетом, пожилых людей, пациентов с хроническими заболеваниями или после операции. Она также нередко возвращается даже после успешного лечения.

Особенности исследования

Метод ПЦР, использующийся для качественного определения ДНК Clostridium difficile в образце кала, позволяет точно выявить наличие бактериальной ДНК. Даже если количество бактерий в организме не значительное — анализ выявит их в образце. Он имеет высокую точность и специфичность, не требуя продолжительного времени для получения результатов.

ПЦР позволяет не только выявить бактерию, но и типировать штаммы C. difficile, выделяющие токсин A и токсин B. Это особенно важно, поскольку именно эти токсины вызывают повреждения слизистой оболочки кишечника. С его помощью определяется степень угрозы, исходя из токсичности штамма.

Когда и зачем назначают анализ

Показания к проведению анализа:

• симптомы воспаления кишечника (боль в животе, лихорадка, водянистая диарея);
• диарея, особенно после курса антибиотиков;
• подозрение на псевдомембранозный колит;
• неясная или тяжелая диарея у госпитализированных пациентов;
• рецидивы инфекций, вызванных Clostridium difficile;
• подозрение на носительство C. difficile;
• обострения хронических заболеваний ЖКТ;
• нарушение функции кишечника без видимой причины.

Исследование требуется для:

• подтверждения или исключения наличия инфекции, вызванной Clostridium difficile;
• типирования токсинов A и B;
• подтверждения псевдомембранозного колита;
• дифдиагностики инфекций и других причин развития диареи;
• определения рецидивов инфекции;
• оценки устойчивости инфекции;
• выявления носительства C. difficile;
• подтверждения эффективности лечения.

Назначают анализ: инфекционисты, гастроэнтерологи, семейные врачи, педиатры, терапевты, хирурги, онкологи.

Правила подготовки

Необходимо собрать свежий образец кала в утренние часы. Для точности анализа рекомендуется использовать чистую, сухую емкость для сбора кала. Контейнер должен быть стерильным, чтобы избежать внешнего загрязнения и ложных результатов. Его можно приобрести в отделении лаборатории Николаб или аптеке. Материал должен быть доставлен в лабораторию в максимально короткий срок (не более 4 часов).

Перед забором кала важно отказаться от:

• приема противодиарейных и слабительных препаратов за 3 суток;
• приема антибактериальных препаратов за 14 суток;
• местного использования ректальных свечей, масла, антисептических препаратов за 3 суток;
• употребления препаратов и продуктов, которые могут окрашивать кал — активированный уголь, железо, висмут, морковь, свекла, куркума и пр. за 3 суток.

Других строгих ограничений в отношении диеты перед сдачей анализа нет, но желательно избегать тяжелой, жирной пищи и чрезмерного употребления алкоголя накануне.

Перед сбором важно провести туалет с использованием нейтрального мыла и воды. Для анализа требуется всего 10-15 грамм материала, поэтому рекомендуется провести акт дефекации в одну емкость, после чего собрать участки кала с помощью ложечки из трех точек — начала, середины и конца масс.

Интерпретация результатов

Положительный результат анализа означает, что:

• развивается активная инфекция, вызванная Clostridium difficile;
• инфекция связана с токсином А или В;
• произошел рецидив инфекции;
• имеется носительство бактерии.

Отрицательный результат анализа означает, что:

• инфекция отсутствует;
• инфекция связана с другим агентом;
• лечение было назначено правильно;
• имеется неактивное носительство;
• развивается стадия ремиссии.

В случае смешанных инфекций, когда Clostridium difficile присутствует в организме наряду с другими кишечными патогенами, это может затруднить интерпретацию результатов.

Важные примечания

Антибиотики могут подавлять рост C. difficile или его токсинов, что приведет к ложноположительным или ложноотрицательным результатам. Если образец был неправильно собран или транспортирован, также бывают ложные результаты. Важно соблюдать все правила подготовки по сбору материала, чтобы избежать ошибок.