Трихомонада вагиналис (Trichomonas vaginalis), количественное определение ДНК возбудителя методом ПЦР (соскоб, моча)

Анализ на Trichomonas vaginalis методом количественной ПЦР представляет собой современный способ диагностики урогенитального трихомониаза — одного из наиболее распространенных заболеваний, передающихся половым путем. Основу метода составляет амплификация — многократное увеличение копий фрагмента ДНК возбудителя под действием ДНК-полимеразы, что обеспечивает высокую чувствительность. Даже минимальное количество генетического материала паразита в образце (например, в моче или урогенитальном соскобе) становится достаточным для его обнаружения. В случае положительного результата определяется концентрация выявленного ДНК, что помогает точнее оценить тяжесть инфицирования.

Возбудителем инфекции является Trichomonas vaginalis — простейший микроорганизм, поражающий слизистые оболочки органов мочеполовой системы. У женщин он чаще всего локализуется во влагалище и уретре, у мужчин — преимущественно в уретре. Заражение происходит в основном при незащищенном половом контакте, реже — вертикальным путем от матери к ребенку или при родах. Бытовой путь передачи маловероятен, так как паразит быстро гибнет вне организма человека. У женщин в репродуктивном возрасте встречается чаще всего. При внутриутробном заражении инфекция может сохраняться в организме девочек без клинических проявлений до наступления полового созревания. Отмечается, что от 10 до 50 % женщин и до 70 % мужчин являются бессимптомными носителями. При развитии симптоматики у женщин возможен: зуд, боль при мочеиспускании и неприятные выделения, у мужчин — признаки уретрита с легким зудом и белыми пенистыми выделениями.

Опасность бессимптомного течения заключается в высокой вероятности осложнений и передачи инфекции партнеру. У женщин воспаление может охватывать влагалище, уретру и шейку матки. У мужчин в редких случаях поражаются простата и придатки яичек. Помимо риска осложнений в виде бесплодия и нарушений течения беременности, трихомониаз повышает уязвимость к другим ИППП. В связи с этим лабораторные исследования играют ключевую роль в диагностике. Традиционные методы — микроскопия, культуральный посев, серология — имеют ограниченную чувствительность и требуют времени. Наиболее информативным и быстрым является ПЦР-исследование, признанное «золотым стандартом» диагностики. При количественном подходе к ПЦР анализу измеряется концентрация ДНК после каждого цикла, сравнивая данные с эталонным образцом с известным содержанием ДНК.

Показаниями к назначению анализа служат как острые симптомы воспаления мочеполовой системы, так и хронические заболевания, бесплодие, патологии беременности, наличие других половых инфекций, высокая вероятность заражения и положительные результаты у полового партнера. Анализ также назначается в целях контроля эффективности терапии и при планировании беременности. Своевременное выявление бессимптомного носительства позволяет предупредить развитие осложнений и снизить распространение инфекции.

Подготовка к исследованию требует соблюдения ряда условий. Анализ следует проводить до начала антибактериального лечения или не ранее чем через три недели после его окончания. При использовании местных антисептиков или противогрибковых препаратов их применение прекращают минимум за две недели до анализа. Женщинам рекомендуется сдавать биоматериал до менструации либо через несколько дней после ее завершения. За три дня до исследования необходимо отказаться от половых контактов. Перед сдачей соскоба не следует использовать тампоны, средства интимной гигиены с антисептиками, а мужчинам необходимо воздержаться от мочеиспускания за 2–3 часа до процедуры. Для ПЦР на основе мочи используется первая утренняя порция.

Положительный результат подтверждает присутствие трихомонады и позволяет врачу оценить форму течения заболевания — острую, хроническую или латентную — на основании клинической картины и количества ДНК. Отрицательный результат может означать либо отсутствие возбудителя, либо слишком низкое его количество, недостаточное для регистрации, либо наличие веществ, ингибирующих реакцию.

При выявлении трихомонадной инфекции важно провести обследование полового партнера и через три месяца после завершения лечения сдать повторный анализ, чтобы исключить повторное заражение. Количественное ПЦР-исследование, как наиболее точный и быстрый метод, особенно актуально в лабораториях, где применяются чувствительные тест-системы и проводится комплексная диагностика других ИППП.

Анализ на трихомонаду вагиналис (количественное определение ДНК методом ПЦР) – один из прямых методов диагностики половых инфекций, а именно – урогенитального трихомониаза. Метод ПЦР основан на амплификации – многократном увеличении количества копий фрагмента ДНК возбудителя под действием фермента ДНК-полимеразы. Метод отличается высокой чувствительностью – достаточно, чтоб в биологическом материале пациента (моче, соскобе) содержался небольшой фрагмент ДНК возбудителя, полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет накопить его в количестве, достаточном для обнаружения. При положительном результате (если ДНК возбудителя выявлена) осуществляется количественная оценка (учитывается концентрация генетического материала в образце).

Что нужно знать про количественное определение ДНК Trichomonas vaginalis

Trichomonas vaginalis (трихомонада вагиналис) – простейший одноклеточный паразит, который колонизирует органы мочеполовой системы (у мужчин слизистую оболочку уретры, у женщин – влагалища и уретры, редко – другие органы). Трихомонады относятся к истинным патогенам и вызывают инфекционное заболевание – трихомониаз, который является наиболее распространенным ЗППП. Источником трихомонадной инфекции может быть больной или носитель возбудителя, заражение происходит преимущественно половым путем, возможна передача инфекции от матери ребенку во время беременности и в процессе родов. Случаи заражения контактно-бытовым путем редки, поскольку вне человеческого организма возбудитель быстро погибает.

У женщин Trichomonas vaginalis выявляется преимущественно в репродуктивном возрасте (16-35 лет), в случае внутриутробного заражения девочек возбудитель обычно персистирует в организме, не вызывая симптомов, и активизируется в период полового созревания. У 10-50% женщин трихомониаз протекает бессимптомно, у остальных проявляется генитальным зудом, болезненными мочеиспусканиями, выделениями из половых органов с интенсивным неприятным запахом. У большей части инфицированных мужчин (60-70%) клинические симптомы отсутствуют, к классическим клиническим проявлениям относятся симптомы уретрита (легкий зуд, умеренные белесые пенистые выделения из уретры), иногда – болезненное мочеиспускание.

Бессимптомный трихомониаз опасен тем, что носитель является источником инфекции, но не подозревает об этом, а из-за отсутствия лечения могут развиться осложнения. У женщин воспалительный процесс может поражать шейку матки (цервицит), мочеиспускательный канал (уретрит), слизистую оболочку влагалища (вагинит). У мужчин в редких случаях воспаление распространяется на простату, придатки яичек. Заболевание трихомониазом повышает риск заражения другими половыми инфекциями, может привести к бесплодию, осложнениям беременности.

В связи с частыми случаями бессимптомного течения и неспецифической клинической симптоматикой ключевая роль в диагностике трихомониаза отводится лабораторным анализам. Для диагностики этого заболевания применяются микроскопические, цитологические, культуральные, серологические и молекулярно-генетические исследования. Микроскопическое выявление микроорганизмов типа Trichomonas vaginalis затруднено, при использовании культурального метода (бакпосева) для получения результатов требуется не менее недели. Из серологических исследований наиболее информативным является анализ на антитела класса IgG, антитела других классов при трихомониазе не всегда выявляются из-за низких иммуногенных свойств Trichomonas vaginalis.

В настоящее время «золотым стандартом» диагностики является ПЦР-исследование, которое сочетает высокую специфичность, чувствительность и возможность быстрого получения результатов. При количественном определении ДНК возбудителя после каждого цикла амплификации концентрация генетического продукта в исследуемом образце сравнивается с калибратором (образцом, концентрация ДНК в котором точно известна).

Когда и зачем назначается анализ на трихомонаду вагиналис (количественное определение ДНК возбудителя методом ПЦР)

Молекулярно-генетический анализ на трихомонаду вагиналис с количественным определением ДНК назначается:

• при симптомах острого воспалительного процесса мочеполовой системы;
• при хронических заболеваниях органов мочеполовой системы;
• если у пациента диагностированы другие ЗППП;
• при высоком риске заражения половыми инфекциями;
• если трихомониаз диагностирован у полового партнера;
• при бесплодии, осложнениях беременности, преждевременных родах, рождении ребенка с недостаточной массой тела в анамнезе;
• при планировании беременности;
• после завершения курса антибиотикотерапии при трихомониазе.

ПЦР-исследование с количественным определением ДНК Trichomonas vaginalis проводится для:

• выявления носителей трихомонады вагиналис, диагностики бессимптомного трихомониаза, профилактики его осложнений и предупреждения распространения инфекции;
• дифференциальной диагностики ЗППП;
• подтверждения или исключения роли Trichomonas vaginalis в развитии воспалительного процесса мочеполовой системы, назначения адекватной терапии;
• выявления или исключения сопутствующей трихомонадной инфекции при подтвержденной гонорее;
• оценки эффективности антибактериальной терапии трихомониаза;
• выяснения причин бесплодия, осложнений беременности.

Анализ может выполняться по назначению венеролога, гинеколога, уролога.

Как подготовиться к анализу на трихомонаду вагиналис (ПЦР-исследованию с количественным определением ДНК в моче, соскобе)

Независимо от пола пациента и биологического материала, который используется для ПЦР-исследования, оно должно проводиться до начала антибактериальной терапии или минимум через 3 недели после ее завершения. Местное применение антибактериальных, противогрибковых лекарственных препаратов необходимо отменить за 2 недели до исследования. Женщинам рекомендуется сдавать анализ перед менструацией либо через 3-4 дня после ее завершения.

Правила подготовки к забору урогенитального соскоба:

• за 3 дня до взятия соскоба воздерживаться от половых контактов;
• женщинам на протяжении 3 суток накануне не спринцеваться, не применять вагинальных препаратов и не пользоваться тампонами;
• накануне не применять средства интимной гигиены с бактерицидным эффектом;
• мужчинам на протяжении 2-3 часов перед взятием соскоба воздержаться от мочеиспускания;
• взятие соскоба выполняется до или минимум через 3 часа после проведения туалета наружных половых органов;
• у женщин урогенитальный соскоб берется до мануального гинекологического обследования и трансвагинальных инструментальных диагностических процедур (или минимум через сутки после).

Правила подготовки к сбору мочи стандартные – накануне рекомендуется исключить острые, соленые блюда и алкоголь, непосредственно перед сбором выполнить тщательный туалет наружных половых органов. Для ПЦР-исследования используется первая порция (50-60 мл) утренней мочи.

Интерпретация результатов анализа на трихомонаду вагиналис с количественным определением ДНК

Результат анализа может быть положительным или отрицательным, при положительном результате указывается концентрация ДНК – количество копий на мл.

Возможные причины отрицательного результата (ДНК не выявлена, 0 копий):

• отсутствие Trichomonas vaginalis в организме;
• отсутствие в исследуемом образце фрагментов ДНК или содержание ниже порога чувствительности тест-системы;
• ложноотрицательный результат – наличие в образце ингибитора полимеразной цепной реакции.

Отрицательный результат анализа на трихомонаду вагиналис в сочетании с симптомами урогенитального воспаления, ЗППП указывает на то, что заболевание вызвано другим возбудителем.

Положительный результат указывает на инфицирование Trichomonas vaginalis, позволяет подтвердить этиологическую роль этого патогена в развитии воспалительного процесса, возникновении клинических проявлений. С учетом количественных показателей и особенностей клинической картины врач может дифференцировать острую, хроническую, латентную инфекцию.

Важные замечания

При положительном результате анализа (независимо от количественных показателей) обязательно обследование на трихомониаз полового партнера пациента.

При трихомониазе существует высокий риск реинфекции, для исключения или выявления которой необходимо сдать повторный анализ через 3 месяца после успешного завершения лечения (получения отрицательного результата).

Преимущества ПЦР-исследования с количественным определением ДНК Trichomonas vaginalis в лаборатории Николаб

Для диагностики трихомониаза методом ПЦР в лаборатории Николаб применяются высокочувствительные тест-системы, передовая методика позволяет в сжатые сроки получить информативный результат. Также в лаборатории можно сдать другие анализы для диагностики трихомониаза.